CRISPR-Cas9 вызывает большой интерес как инструмент для разработки противоопухолевой клеточной терапии или для исправления генетических дефектов, которые вызывают наследственность в стволовых и соматических клетках. Однако, поскольку не существовало надежного и чувствительного метода для измерения точности CRISPR-Cas9 в масштабе всего генома, его безопасность оставалась под вопросом.
Следовательно, было трудно исключить возможность того, что CRISPR-Cas9 может индуцировать мутации в последовательностях вне мишени, которые аналогичны последовательностям на мишени. Мутации вне мишени в генах-супрессорах опухолей, например, могут вызывать рак.Исследователи разработали метод, названный Digenome-seq, для обнаружения как целевых, так и нецелевых последовательностей, которые могут быть мутированы с помощью CRISPR-Cas9 посредством секвенирования генома.
Они переваривали геномную ДНК человека с помощью нуклеаз Cas9 в пробирке, которую затем подвергали полному секвенированию генома. Этот гидролизат in vitro дал уникальный образец как на целевых, так и на нецелевых последовательностях, которые можно идентифицировать с помощью вычислений.
Более того, добавив гуаниновые нуклеотиды в конец sgRNA (single-guided RNA), которая составляет CRISPR-Cas9, они успешно создали эту высокоразвитую программируемую нуклеазу, которая не имеет поддающихся измерению побочных эффектов в геноме человека.Джин-Су Ким, директор Центра геномной инженерии в IBS, а также профессор кафедры химии Сеульского национального университета, говорит: «Если CRISPR-Cas9 усекает нецелевые последовательности ДНК, это может вызвать нежелательные мутации.
Поскольку нам удалось подтвердить точность CRISPR-Cas9, мы ожидаем значительного прогресса в разработке генной или клеточной терапии », подчеркивая важность этого достижения исследования.