Здесь в структурном анализе Jiyung Shin et al. сначала изучили, как природный белок-ингибитор AcrIIA4 взаимодействует с ферментом Cas9. Они обнаружили, что AcrIIA4 связывается с ферментом в «кармане», в который в противном случае могла бы поместиться ДНК, блокируя прикрепление фермента к целевой ДНК и разрезание ее. Изучение человеческих клеток показало, что если эти клетки обрабатывали белком-ингибитором до начала редактирования гена, комплекс CRIPSR-Cas в значительной степени предотвращал разрезание ДНК в любом месте. Результаты также показали, что около половины целевого редактирования ДНК CRISPR-Cas9 (при котором система правильно отсекает гены, которые ученые надеются редактировать) произошло в течение 6 часов после внедрения системы.
Некоторые предыдущие исследования показали, что комплекс может какое-то время оставаться на нецелевых участках, не разрезая их. Используя этот график, Шин и др. представили комплекс CRISPR-Cas9, направленный на разрезание двух генов, включая ген, ответственный за серповидно-клеточную анемию, в клетки лейкемии человека, а затем через 6 часов добавили AcrIIA4.
Результаты показали, что добавление AcrIIA4 в нужное время предотвращает резку в неправильных местах, в то же время оставляя время для резки в нужных местах.