Системы CRISPR-Cas упростили модификацию генов у мышей и крыс. Путем введения информационной РНК и гРНК Cas9, гРНК распознает нацеленную ДНК, а Cas9 разрезает целевой сайт.
Разрывы ДНК восстанавливаются за счет негомологичного соединения концов, что вызывает мутации ДНК, приводящие к нокауту гена.Аналогичным образом, когда ssODN вводится с Cas9-gRNA, разрывы ДНК репарируются посредством гомологически направленной репарации с использованием донорской ДНК, что приводит к выбиванию последовательностей ДНК от одного до нескольких десятков оснований (bp). Однако ssODN позволял синтез олигонуклеотидов размером до 200 п.н., что затрудняло выбивание больших последовательностей ДНК, таких как GFP (зеленый флуоресцентный белок).С помощью этих двух методов модификации генов этой группе удалось добиться эффективного и точного «нокаута» генов GFP, введения больших геномных областей (примерно 200 кб), что обычно было невозможно, а также замены крысиных генов генами человеческого происхождения. , или создание гена гуманизированных животных.
Эти два метода увеличивают эффективность генной инженерии у мышей и крыс, а также у других различных видов организмов и станут очень полезными методами для создания новых генно-инженерных организмов. Ожидается, что эти генно-инженерные организмы будут использоваться в широкой области исследований, таких как разработка лекарств, трансляционные исследования и регенеративная медицина.