Система PITCh более удобна и эффективна, чем существующие методы вставки чужеродной ДНК в целевые геномные локусы с использованием инструментов редактирования генома. Этот новый универсальный метод может способствовать быстрому развитию исследований в таких областях, как скрининг новых кандидатов в лекарства и создание клеточных или животных моделей болезней человека.Редактирование генома — это инновационный метод, используемый в генной инженерии, который позволяет исследователям изменять геном не случайным образом, а с определенной целью.
В этом методе исследователи используют сконструированные нуклеазы в качестве «молекулярных ножниц», которые создают разрывы ДНК в желаемых местах генома. Когда разрывы ДНК восстанавливаются путями репарации, индуцируются генетические модификации, включая вставку чужеродной ДНК в геном (нокаут) и замену или удаление целевого геномного локуса.«Система PITCh — это альтернативный метод, который не зависит от гомологичной рекомбинации (HR), одного из путей репарации разрывов ДНК, в отличие от существующих методов, в которых используются инструменты редактирования генома, такие как TALEN или CRISPR-Cas9, которые в основном используют HR ", — сказал доктор Сакума. «Существующие методы нокаута не могут быть применены к каждому типу клеток и организмов из-за различных частот ЧСС.
Поэтому мы нацелены на другой путь восстановления, микрогомологически-опосредованное соединение концов (MMEJ), и разработали систему PITCh».В этой статье мы описываем подробные процедуры для создания желаемого вектора, трансфекции его в клетки, выбора поврежденных клеток и проверки после вставки вместе с реальным успешным примером.
Кроме того, описан упрощенный метод встраивания генов в эмбрионы лягушки. Эта статья позволит исследователям легко использовать этот мощный инструмент и будет способствовать прогрессу не только фундаментальных, но и прикладных исследований в области наук о жизни.