Эрин Тран, штатный научный сотрудник, который работает в Лаборатории клеточной биологии / биофизики секции Национального института рака NIH, представит исследование на 61-м ежегодном собрании Биофизического общества в Новом Орлеане, штат Луизиана, которое пройдет с 11-15 февраля. 2017.
Тран использовал методы криоэлектронной микроскопии (крио-ЭМ), чтобы определить, внедряются ли белки HA в форме шипов в их естественной среде в вирусную мембрану, имитируя то, что тело может видеть, когда оно подвергается воздействию вирусов гриппа. Работа является частью продолжающегося сотрудничества между лабораториями Питера Палезе и Флориана Краммера на горе Синай и Шрирама Субраманиама в NIH.«В нашем случае этот процесс начинается с вирусов, взвешенных в жидкости», — сказал Тран. «Несколько капель вирусной суспензии, содержащей тысячи вирусов, помещаются на крошечную круглую медную сетку. Лишняя жидкость смывается фильтровальной бумагой, и сетка немедленно погружается в лужу жидкого этана, которая подвергается поддерживается при температуре около -180 ° C. Это замораживает вирусы в очень тонком слое, похожем на стекло, и позволяет нам отображать их в естественном состоянии ».
После замораживания вирусы визуализируются с помощью электронного микроскопа.«Мы получаем трехмерное изображение, используя процедуру, которая включает в себя сбор серии изображений вируса в различных ориентациях относительно падающего электронного луча», — сказала она. «Изображения спайкового белка HA от отдельных вирусов« зашумлены », но усредняя изображения от нескольких вирусов, мы можем получить более точное представление о форме поверхностного белка HA».Тран и его коллеги были удивлены гибкостью и устойчивостью, продемонстрированными белком НА гриппа.
Когда белки сделаны из двух разных штаммов ДНК и, следовательно, названы химерными, команда обнаружила драматический поворот.«Головная часть белка смещена от стеблевой части почти на 60 градусов, но вирусы, которые экспрессируют эти химерные НА, все еще функционируют, и химерный белок по-прежнему способен связывать антитела, которые нацелены на головку или ствол белка», — сказал Тран. «[Работа] показывает, что криоэлектронная томография может использоваться как эффективный способ охарактеризовать вакцины-кандидаты против гриппа в местном контексте».
Их следующая цель — выяснить, являются ли структурные изменения, которые они видят в этом конкретном химерном белке НА, репрезентативными для более широкого набора химерных НА.«В целом, мы заинтересованы в использовании криоэлектронной микроскопии и томографии для визуализации механизмов, которые вирусы используют для заражения клеток», — сказал Тран. «Мы изучаем множество вирусов в оболочке, включая ВИЧ и Эбола, чтобы лучше понять механизмы, с помощью которых может быть заблокировано их проникновение в клетки».